G6PDH(G6PD)来源于红细胞,催化葡萄糖6磷酸,生成的NADPH是谷胱甘肽还原酶的辅酶,还原型谷胱甘肽(GSH)是保持血红蛋白稳定性及红细胞膜完整性的必要条件。红细胞G6PD缺乏者,在服用某些药物(如抗疟药伯氨喹啉、磺胺药等)及食用蚕豆后,代谢产生的自由基,或与氧合血红蛋白作用形成的H2O2,使GSH氧化成GSSG。由于GSH降低,Hb巯基失去GSH的保护,被氧化变性形成Heinz小体。红细胞膜失去巯基保护而功能受损,终致溶血。G6PD缺乏(陷)基因在X染色体上,通过女性遗传,男性患者居多。
一、概况
1.反应式
2.米氏常数
3.专一性
此酶对葡糖-6-磷酸具有高度的专一性。由酵母来源的葡糖-6-磷酸脱氢酶,对一些底物的相对速度是:葡糖-6-磷酸为1.00,半乳糖-6-磷酸为0.25,2-脱氧葡糖-6-磷酸为0.18,葡糖胺-6-磷酸为0.02。酵母来源的酶仅作用于NADP,而由肠系膜明串珠菌来源的酶对于NAD与NADP的作用却完全相同。
4.激活剂与抑制剂
当Mg2+离子在5~10毫克分子浓度范围内能激活此酶;然而,高浓度的Mg2+离子与二价的其它一些离子却起抑制作用。单磷酸核苷酸以及若干二磷酸与三磷酸的核苷酸,诸如腺苷二磷酸(ADP)、腺苷三磷酸(ATP)、鸟苷三磷酸(GTP)以及尿苷三磷酸(UTP)皆有抑制作用。业已证明由肠系膜明串珠菌来源的酶不需要Mg2+离子。
5.纯度要求
所需的纯度至少应为每毫克蛋白含单位酶活性,而6-磷酸甘油酸脱氢酶(6-PGDH)与葡糖磷酸变位酶(PGlu)含量不能大于0.01%,HK含量也不能超过0.02%。
6.意义
葡糖-6-磷酸脱氢酶可对辅酶Ⅱ(NADP葡糖-6-磷酸、葡糖-1-磷酸、已糖激酶以及磷酸葡糖异构酶(PGI)进行酶法测定。然而,已糖激酶测定葡萄糖最为专一。
在临床上,通过葡糖-6-磷酸脱氢酶的测定,对于研究药物试验引起的溶血性贫血具有诊断价值。根据不同敏感人体内红血细胞中葡糖-6-磷酸脱氢酶活性水平的变化情况,则可分为:(1)药物引起的变化,(2)非药引起的变化,(3)蚕豆病(favism)以及(4)疾病引起的变化。
对于那些可能接触过致溶血剂的人员,特别是那些使用过抗疟药的人,业已推荐葡糖-6-磷酸脱氢酶活性缺陷作为一种鉴别指标。甚至当输血后因溶血作用而使红血细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶缺陷,这是由于输血者的血液中可能隐藏了潜在的溶血因素。
人们认为,葡糖-6-磷酸脱氢酶的活性对于维持红血细胞活力是一种调节因子,因此,红血细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶缺陷的人应避免与某些有害物质相接触,预防发生溶血性疾病。
7.稳定性
将结晶状的酶制剂悬浮在pH6、3.2M硫酸铵溶液中,于4℃下保存则能稳定若干月时间。将此冷冻干燥的酶制剂于4℃下保存3个月活性尚无丧失。
二、测定方法
1.分光光度法
测定原理:
皆以nm处测量NADPH(适用酵母来源的酶)或NADH(适用肠系膜明串珠菌来源的酶)的吸光率增量。1个活性单位定为在特定条件下,温度为25~30℃,每分钟能还原1微克分子的吡啶核苷酸所需的酶量。
2.荧光法
酶促反应过程中产生的NADPH可于激发波长nm处(使用汞灯)与发射波长nm处加以测量。适用于红血细胞中葡糖-6-磷酸脱氢酶的自动化荧光测定法。