血红蛋白病

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细胞色素b5含量检测试剂盒可见分光光度 [复制链接]

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细胞色素b5含量检测试剂盒(可见分光光度法)

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

产品货号:BA

产品规格:50管/48样

产品简介:

细胞色素P酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和*物的代谢。细胞色素P和细胞色素b5是P酶系的两个血红素蛋白,其比值的变化与P代谢活性密切相关。

氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后,在nm处有最大吸收峰,通过测定nm和nm处吸光值的差异,即可计算出细胞色素b5的含量。

产品组成:

试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加mL蒸馏水,充分溶解。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。

工作液配制:临用前配制,戴一次性手套,小心打开试剂三瓶盖,加试剂二50mL充分溶解,4℃避光可保存1周。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

操作步骤:

样品中细胞色素b5提取:

1.除去细胞核,线粒体等大分子物质:称约0.5g组织,加入1mL试剂一,冰上充分研磨,00g4℃离心30min,取上清液,转入超速离心管中。

2.粗制微粒体:000g,4℃离心60min,弃上清液。

3.除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,000g离心30min,弃上清液。

4.待测液:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5mL,盖紧后充分震荡溶解,即待测液,该待测液需当天测定。

细胞色素b5含量测定操作:

1.分光光度计预热30min。

2.工作液置于25℃水浴中预热30min。

3.空白管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL蒸馏水,0μL工作液,室温静置2min,nm和nm处吸光值,nm处吸光值记为A空白管1,nm处吸光值记为A空白管2。△A空白管=A空白管1-A空白管2。

4.测定管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL待测液,0μL工作液,室温静置2min,nm和nm处吸光值,nm处吸光值记为A测定管1,nm处吸光值记为A测定管2。△A测定管=A测定管1-A测定管2。

注意:只需要做一个空白管。

样品细胞色素b5含量计算公式:

(1)按照蛋白浓度计算/p>

细胞色素b5含量(nmol/mgprot)=(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)

=0.×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

(2)按照样本质量计算/p>

细胞色素b5含量(nmol/g鲜重)=(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×(V样总÷V样)÷W

=0.×(△A测定管-△A空白管)÷W

ε:还原型细胞色素b5纳摩尔消光系数,×10-3L/nmol/cm;d:比色皿光径(cm),1cm;V反总:反应体系总体积,1.05mL=0.L;Cpr:待测液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V样:加入反应体系中待测液体积,50μL=0.05mL;V样总:待测液总体积,0.5mL;W:样品质量,g。

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