血红蛋白病

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普鲁士蓝染色试剂盒核固红法 [复制链接]

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普鲁士蓝染色试剂盒(核固红法)

产品货号:

产品规格:2×50ml

产品简介:

含铁血*素(Hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素,为金*色或棕*色颗粒,因其含铁、金*色,故称为含铁血*素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后,在溶酶体酶的作用下,血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血*素。

Perls普鲁士蓝反应(Prussianbluereaction)又称为含铁血*素染色,即经过亚铁氰化钾和稀酸处理后可以产生蓝色,常见于吞噬细胞内会间质内,主要显示三价铁盐。Perls普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应,是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法,其染色原理为:亚铁氰化钾溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来,三价铁与亚铁氰化钾反应,生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁氰化物普鲁士蓝,所以该反应被称为普鲁士蓝反应。三价铁的亚铁氰化物是一种很稳定的化合物,在反应后可用红色染色剂进行复染,如核固红、伊红、中性红等。

Perlsstain常用于显示局部组织内各种出血性病变,常见于吞噬细胞内。在判断含铁血*素沉积时,用Perls反应可以得到证实,该染色方法可以很好的区分含铁血*素和其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广、可以进行复染。该染色液的复染液采用核固红,是最经典、最常用的复染液。

产品组成:

自备材料:

1.10%的中性福尔马林

2.系列乙醇

3.蒸馏水

4.4%的多聚甲醛

操作步骤:(仅供参考)

(一)石蜡切片染色

1.组织固定于10%中性福尔马林,常规脱水包埋。

2.切片厚度4um,常规脱蜡至水。

3.蒸馏水水洗1min。

4.切片入Perlsstain(见注意事项4),浸染15-30min。

5.蒸馏水充分冲洗2-5min。

6.入核固红染色液,淡染细胞核5-10min。

7.自来水冲洗1-5s。

8.常规脱水透明,中性树胶封固。

(二)冰冻切片染色

1.无需脱蜡,直接迅速用蒸馏水冲洗2~3min。

2.染色、水洗、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

(三)细胞染色

1.4%多聚甲醛固定10~20min。

2.自来水冲洗2次,每次2min。

3.蒸馏水冲洗2次,每次2min。

4.染色、水洗、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

染色结果:

含铁血*素或三价铁蓝色

细胞核、其他组织红色

阴性对照(可选)

取相同连续切片脱蜡至水。置于5%的草酸中,孵育2-6h后,经Perlastain,需要步骤同上。结果为阴性。

注意事项:

1.切片脱蜡应尽量干净。

2.组织固定常采用10%的中性福尔马林,经普通福尔马林长期固定后,组织会有损伤。避免使用酸性固定剂,酪酸盐处理也会妨碍铁的保存。

3.整个操作过程中容器要干净,避免使用金属铁制品,洗切片和容器时以蒸馏水为宜,因普通水内含铁质。

4.Perlsstain染色时,应根据样本情况调整着色时间。

5.所有检查切片都应使用同一个阳性对照切片,选择适合的对照非常重要。尸检肺组织是一个很好的对照,包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞)。

6.系列乙醇应经常更换新液。

7.冰冻切片和细胞的染色,最好根据具体情况摸索实验条件。

8.为了您的健康和安全,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:12个月有效。

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