NADPH-细胞色素C还原酶（NCR）活性检测试剂盒（可见分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50管/48样
产品简介：
细胞色素P酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和*物的代谢。NCR作为P酶系的重要一员，催化氧化型P还原再生。
NCR催化NADPH还原氧化型细胞色c生成还原型细胞色素c，还原型细胞色素c在nm处有特征吸收峰；通过测定nm吸光度的增加速率，来计算NCR活性。
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
产品组成：
溶液的配制：
1.试剂三：临用前加2.60mL蒸馏水充分溶解，4℃保存。
2.试剂四：临用前加入μL蒸馏水充分溶解，4℃保存。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、普通离心机、超速离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1.除去细胞核和线粒体等：称约0.5g组织，加入4℃预冷的1mL试剂一，冰上充分研磨，g4℃离心30min，取上清液，转移到超速离心管中。
2.粗制微粒体：4℃，0g，离心60min，弃上清液。
3.除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，0g离心30min，弃上清液。
4.最终微粒体：向步骤3的沉淀中加试剂二0.5mL，盖紧后充分震荡溶解，4℃保存待测。
二、测定操作：
1.分光光度计预热30min，调节波长到nm，蒸馏水调零。
2.试剂二在37℃水浴中预热30min。
3.空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL蒸馏水、μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀后于nm处测定2min内吸光值变化，第10s和第s吸光值分别记为A1和A2，△A空白管=A2-A1。
4.测定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL粗酶液、μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀后于nm处测定2min内吸光值变化，第10s和第s吸光值分别记为A3和A4，△A测定管=A4-A3。
注意：空白管只需做一次。
三、NCR活性计算公式：
(1)按照蛋白浓度计算:活性单位定义：37℃中，每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素c为1个酶活单。NCR酶活性（nmol/min/mgprot)=（ΔA测定管-ΔA空白管）÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T=×（ΔA测定管-ΔA空白管）÷Cpr
(2)按照样本质量计算:活性单位定义：37℃中，每克样品每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素c为1个酶活单位。NCR酶活性（nmol/min/g）=（ΔA测定管-ΔA空白管）÷ε÷d×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=×（ΔA测定管-ΔA空白管）÷W
ε：还原型细胞色素C摩尔消光系数，L/mol/cm=0.L/μmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，μL=0.L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定；V样：加入反应体系中上清液体积，50μL=0.05mL；V样总：加入提取液体积，0.5mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2min。
注意事项：
试剂三、试剂四临用前配制，配好未使用完的4℃可保存两天。
