总蛋白检测试剂盒（双缩脲微板法）
产品货号：BA
产品规格：T
产品简介
总蛋白(TotalProtein，TP)由白蛋白和球蛋白组成，对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性，目前常用的检测总蛋白的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。
总蛋白检测试剂盒(双缩脲微板法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色的化合物，此化合物在nm的吸光度与肽键的数量呈正比例关系，因此可计算出蛋白质的含量。双缩脲法测蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂的影响。另外，对于血清总蛋白的双缩脲分析，胆红素、
脂类、血红蛋白、葡聚糖具有一定干扰作用。双缩脲法在5～mg/ml浓度范围内有较好的线性关系。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品内容：
自备材料：
1.待测样品(血清、血浆、组织)
2.离心管或小试管
3.水浴锅或恒温箱
4.酶标仪、96孔板
5.生理盐水(0.9%NaCl)或PBS
6.匀浆器或研钵
操作步骤（仅供参考）：
1.取0.25ml蛋白标准配制液或稀释液加入到40mg蛋白标准中，充分溶解后即配制成蛋白标准溶液(mg/ml)，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。亦可根据需要进行稀释，如稀释至40mg/ml。特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，例如待测蛋白溶解于蔗糖溶液中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖溶液中。常用0.9%NaCl或PBS作为总蛋白标准品的稀释液。
2.样本处理：
血清、血浆样本，直接取4μl检测；
对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水(ml)=1：9比例，加入9倍体积的生理盐水，冰浴下匀浆后，g离心10min，取上清液并补生理盐水至10ml待检。
3.TP加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
注意：当遇到浑浊或溶血样本时，可设“样本空白管”：取0.04ml待测样品加入2ml双缩脲空白试剂即为“样本空白管”，以双缩脲空白试剂调零，读取“样本空白管”的吸光度，用测定管的吸光度减去“样本空白管”的吸光度后的净吸光度，计算总蛋白浓度。
4.TP测定：混匀,37℃孵育10min，用酶标仪测定nm处各孔的吸光度，记为A标准，A测定，如无nm，～nm之间的波长也可，以空白孔调零。
计算：
血清、血浆样本总蛋白浓度(g/L)=A测定/A标准×C
浑浊或溶血样本总蛋白浓度(g/L)=(A测定-A样本空白)/A标准×C
g组织样本总蛋白含量(g/g)=A测定/A标准×C×VT×/m
式中：A测定=测定管的吸光度
A标准=标准管的吸光度
A样本空白=样本空白管的吸光度
C=蛋白标准液浓度(mg/ml=g/L)
VT=组织样本上清液总体积=10ml
m=组织样本的质量(g)
=g组织样本的质量
