蛋白质羰基含量检测试剂盒（货号：AKAO）
超氧阴离子（O）在生物反应过程中起着重要作用，具有免疫和信号传导的功能。超氧阴离子与生物体的衰老和病变密切相关，因其具有很强的氧化性和还原性，当积累过多超出生物体抗氧化防御能力时，会对细胞膜及生物大分子的结构和功能造成损伤，导致机体细胞和组织代谢异常。
超氧阴离子能够氧化盐酸羟胺生成NO，NO在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下，生成粉红色的偶氮化合物，产物在nm处具有特征吸收峰，根据吸光值变化即可定量检测O的含量。
超氧阴离子含量检测原理需自备试剂：氯仿（CHCl，MW=.39，CAS:67-66-3）
测定过程中所需要的仪器和试剂：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱、氯仿和蒸馏水。
1.超氧阴离子的提取（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）
①组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）=1:（5-10）的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃g离心20min，取上清置于冰上待测。
②细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管中，按照细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为（-）:1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎（功率W，超声3s，间隔7s，总时间3min）；4℃g离心20min，取上清置于冰上待测。
③血清、培养液等液体样本：直接测定或使用提取液适当稀释后再进行检测。
2.测定步骤
①分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
②在2mL离心管中依次加入下列试剂：
吸光值测定：吸取1mL上层水相至1mL玻璃比色皿中，测定nm处吸光值，记为A测定、A标准和A空白；计算A测定=A测定-A空白，A标准=A标准-A空白。注：空白管只需测定1-2次。
标准曲线的建立：以0.25、0.20、0.15、0.10、0.05、0.mol/mL标准稀释液浓度为横坐标（x），对应的A标准为纵坐标（y），得到线性回归方程y=kx+b，将A测定带入公式计算x（mol/mL）。
注意事项
①若测定吸光值超出标准线性吸光值范围，低于下限建议适当增加样本后再进行测定，高于上限建议将待测样本使用提取液适当稀释后再进行测定，计算时相应修改；
②待测样本应立刻测定，请勿将样品长时间低温保存，以免影响测定结果；
③氯仿具有一定*性，操作时请做好防护措施；
④为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
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