单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒(醛苯腙微板法)
产品货号:BA
产品规格:T
产品简介:
单胺氧化酶(MonoamineOxidase,MAO)是一组催化多种单胺类化合物氧化脱氨的酶,属于细胞外酶,含有铜离子,分布于肝脏、肾脏等组织的线粒体内,其含量分布为肝脏>心脏>肾脏>脑>肺>骨骼肌。血小板、胎盘中也含有MAO。线粒体中的MAO与膜紧密结合,仅少量为可溶性的,存在于细胞质中,血液和结缔组织中的MAO为水溶性。
尚宝生物单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒(醛苯腙微板法)其检测原理是待测样品在MAO作用下,氧化底物苄胺生成苄醛,后者经催化反应生成醛苯腙,呈棕红色,通过分光光度计检测nm处吸光度,根据标准曲线即可测出MAO活力。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
自备材料:
1.蒸馏水
2.离心管或小试管
3.比色杯
4.分光光度计
使用方法:
1.准备样品:
①血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-70℃冻存,用于MAO的检测。
②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-70℃冻存,用于MAO的检测。
③高活性样品:如果样品中含有较高活性的MAO,可以使用MAOAssaybuffer稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MAO含量。
2.稀释标准品:用MAOAssaybuffer稀释苄醛标准(5mmol/L)至0.5mmol/L,即为苄醛标准工作液,4℃保存,备用。以苄醛标准工作液(0.5mmol/L),按下表制备标准曲线。
3.MAO检测:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
4.混匀,分光光度计nm处检测吸光度值,以蒸馏水调零,读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。绘制标准曲线,根据(A测定-A空白)之差值在标准曲线上查出MAO活力单位。酶活力高于上限者,应将样品稀释后重新测定,结果乘以稀释倍数。
计算:
MAO活性单位的定义:在37℃1ml血清中MAO1h催化底物产生1nmol苄醛为一个MAO酶活力单位。根据酶活性定义,计算出样品中的MAO活性。
以标准管苄醛nmol数为横坐标,以吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,用(A测定-A空白之差值在标准曲线上查出待测样品的苄醛nmol数。)
血清MAO活力(U/ml或nmol/h?ml)=苄醛(nmol)×VT×N/t×Vs=苄醛(nmol)×2.5
组织MAO活力(U/mg或nmol/h?mg)=苄醛(nmol)×VT×N/(t×Vs×待测样品蛋白浓度mg/ml)
式中:
VT=待测样品总体积(μl)
N=待测样品检测前的稀释倍数
Vs=检测时所用样品体积(μl)
t=反应时间(min)
注意事项:
1.胆红素浓度小于μmol/L,血红蛋白浓度小于4g/L,对MAO活力检测没有影响。
2.若更换为国际单位,应除以60。
3.加入苄醛显色缓冲液后,应1h内检测完毕。
4.在皂化过程中,震荡不要剧烈,以免形成乳化层。
5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效