胃蛋白酶（Pepsin）试剂盒说明书（酶标法）
测定意义：
胃蛋白酶是一种消化性蛋白酶，由胃粘膜主细胞分泌，可将食物中蛋白质分解成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
测定原理：
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，其产物进一步与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋白酶活力呈正比。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、酶标板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体，50mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体，15mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂，2支，临用前取1支试剂三，加6.25ml试剂二充分溶解，4℃避光保存，可用2天。
试剂四：固体，1支，加双蒸水10ml充分溶解，4℃保存；
试剂五：固体，1支，加双蒸水15ml充分溶解，4℃保存；
试剂六：液体，2.5ml×1瓶，4℃保存；
标准品：液体，1ml×1支，浓度为0.8mmol/L，4℃保存。
粗酶液提取：
称取约0.05g组织或者50μl胃液，加入0.5mL试剂一进行冰浴匀浆。g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
粗酶液和试剂三置于37℃预热
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充分混匀，rpm，离心10min，取上清60μl，按下表将试剂依次加入酶标板中
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充分混匀，室温静置20min，在酶标仪上测定nm处吸光值。
提醒：
标准空白管和标准管都只需做一管，而空白管和测定管每个样品都做，所以规格为50管/24样，即每个试剂盒实际只能测定24个样品。
粗酶液蛋白质浓度需要另外测定。
胃蛋白酶活性计算：
单位的定义：37℃下，每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol酪氨酸的酶量为一个胃蛋白酶活力单位。
胃蛋白酶（U/mgprot）=80×(△OD测定-△OD空白)/（OD标准管-OD标准空白管）÷蛋白浓度（mg/mL）
注意事项：
试剂三需避光保存，临用前配制，未用完的试剂，4℃保存，可使用2天。
加入试剂四后，需振摇1min左右，使之充分反应。
实验前用1～2个样做预实验，如吸光值过高，需用试剂一稀释后再进行测定。
如测定细胞中胃蛋白酶活性，取~万细胞，除去培养基，消化后，离心弃去其他试剂，然后加试剂一，超声破碎，然后g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
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